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分配色谱
点击次数: 发布时间:2016年12月07日

  原理:主要基于样品分子在流动相和固定相间的溶解度不同(分配作用)而实现分离的液相色谱分离模式。
  键合固定相: 分配色谱原本是基于样品分子在包覆于惰性载体(基质)上的固定相液体和流动相液体之间的分配平衡的色谱方法,因此也称液-液分配色谱。因为作固定相的液体往往容易溶解到流动相中去,所以重现性很差,不大为人们所采用。后来发展起来的键合固定相以化学键合的方法将功能分子结合到惰性载体上,固定相就不会溶解到流动相中去了。这种化学键合型固定相是当今HPLC zui常用的固定相,大约占HPLC固定相的四分之三。

  极性键合固定相: 键合在载体表面的功能分子是具有二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。

  非极性键合固定相: 键合在载体表面的功能分子是烷基、苯基等非极性有机分子。如zui常用的ODS(Octa Decyltrichloro Silane)柱或C18柱就是z典型的代表,它是将十八烷基三氯硅烷通过化学反应与硅胶表面的硅羟基结合,在硅胶表面形成化学键合态的十八烷基,其极性很小。

  正相HPLC(normal phase HPLC): 是由极性固定相和非极性(或弱极性)流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等,代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC,早期的液相色谱中曾广泛采用这种体系。对于一些在非极性疏水固定相中强烈保留的有机分子常常采用正相HPLC模式。
  反相HPLC(reversed phase HPLC): 由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系,与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶,代表性的流动相是甲醇和乙腈。是液相色谱的主要分离模式,几乎可用于能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物质的分离。

   凝胶色谱(gel chromatography)

  原理:以多孔性物质作固定相,样品分子受固定相孔径大小的影响而达到分离的一种液相色谱分离模式。样品分子与固定相之间不存在相互作用力(吸附、分配和离子交换等),因而凝胶色谱又常被称作体积排斥色谱、空间排阻色谱、分子筛色谱等。比固定相孔径大的溶质分子不能进入孔内,迅速流出色谱柱,不能被分离。比固定相孔径小的分子才能进入孔内而产生保留,溶质分子体积越小,进入固定相孔内的机率越大,于是在固定相中停留(保留)的时间也就越长(图8-12)。

                                                      

  固定相:化学惰性的多孔性材料,如聚苯乙烯凝胶、亲水凝胶、无机多孔材料。

  流动相:在凝胶色谱中,流动相的作用不是为了控制分离,而是为了溶解样品或减小流动相粘度。

  凝胶过滤色谱(gel filtration chromatography, GFC): 以水或缓冲溶液作流动相的凝胶色谱法。主要适合于水溶性高分子的分离。

  凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography, GPC): 以有机溶剂作流动相的凝胶色谱法。主要适合于脂溶性高分子的分离。如jia苯和siqingfunan能很好地溶解合成高分子,所以GPC主要用于合成高分子的分子量(分布)的测定。


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